恩諾沙星-雞卵清白蛋白偶聯(lián)物的制備方法有哪些


恩諾沙星-雞卵清白蛋白偶聯(lián)物的制備方法主要有以下幾種:
活化酯法
原理:將恩諾沙星與活化劑反應,生成活化酯中間體,再與雞卵清白蛋白上的氨基等活性基團反應,形成偶聯(lián)物。
步驟:首先將恩諾沙星與活化劑(如N-羥基琥珀酰亞胺等)在合適的溶劑中反應,生成活化酯;然后將雞卵清白蛋白溶解在適當?shù)木彌_液中,調節(jié)pH值,加入活化酯溶液,在一定溫度下反應一段時間;最后通過透析、離心等方法純化偶聯(lián)物。
碳二亞胺法
原理:利用碳二亞胺類試劑(如EDC等)作為偶聯(lián)劑,使恩諾沙星的羧基與雞卵清白蛋白的氨基發(fā)生縮合反應,形成酰胺鍵。
步驟:將恩諾沙星和雞卵清白蛋白分別溶解在不同的緩沖液中,調節(jié)pH值;然后將碳二亞胺試劑加入到恩諾沙星溶液中,攪拌反應一段時間后,再加入雞卵清白蛋白溶液,繼續(xù)反應;反應結束后,通過凝膠過濾、透析等方法純化偶聯(lián)物。
琥珀酸酐法
原理:恩諾沙星的羧基與琥珀酸酐反應,生成帶有羧基的衍生物,再與雞卵清白蛋白的氨基反應。
步驟:先將恩諾沙星與琥珀酸酐在有機溶劑中反應,生成恩諾沙星的琥珀酸酐衍生物;然后將該衍生物與雞卵清白蛋白在緩沖液中反應,調節(jié)pH值和溫度,反應一段時間后,通過離心、透析等方法純化偶聯(lián)物。
其他方法
混合酸酐法:先將恩諾沙星與氯甲酸異丁酯等試劑反應生成混合酸酐,再與雞卵清白蛋白反應。
點擊化學法:利用點擊化學反應,如銅催化的疊氮-炔烴環(huán)加成反應等,將恩諾沙星和雞卵清白蛋白進行偶聯(lián)。
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